パイロテル-T を用いたカイネティック比濁法/検量線の信頼性確認試験

予備試験

1. 検量線の信頼性確認試験

• • 1-1. エンドトキシン標準溶液の調製
    
    • エンドトキシン標準原液（10,000EU/mL）を試験管ミキサーで1分間攪拌する。
    • LRWを用いて10倍段階希釈を繰り返し、0.1EU/mLを調製する。
    • さらに、10倍段階希釈を2回繰り返し、エンドトキシン標準溶液3濃度（1, 0.1, 0.01 EU/mL）を調製する。
      • 段階希釈では各1分間試験管ミキサーで攪拌してください。
      
      
      
      
    
    
    
  • 1-2. ライセート試液の調製
    
    • パイロテル-Tのバイアルを軽く叩いて、飛散した粉末を底に落とす。
    • ピンセットを使って栓を無菌的に持ち上げ、真空状態を解除します。栓は廃棄する。
    • LRWまたは緩衝液（グルカシールドまたはパイロソルインジケータなし）5.0mLをトキシペットチップ1000で加え、バイアルの口に乾熱滅菌アルミ箔をかぶせる。
    • 手でゆっくり円を描くように間欠的に攪拌する。
      • 溶解用のLRWまたは緩衝液の吸引・吐出はゆっくりと行なってください。
      • 試験管ミキサーは泡立ちの原因になりますので、使用しないでください。
      • 凍結乾燥粉末が完全に溶解するまで数分かかります。
      • 溶解後の試薬は2～8℃で保存し、24時間以内に使用してください。
      
      
      
      
    
    
    
  • 1-3. 各試料のプレートへの分注
    
    • LRWおよび1-1で調製したエンドトキシン標準溶液 3濃度（1, 0.1, 0.01 EU/mL）の各0.1mLずつをプレートの所定のウェルに分注する（ウェルパターン例参照）。
      • 調製後のエンドトキシン標準溶液は使用直前に10秒間攪拌してください。
      • 陰性対照として同時にLRWを測定することをおすすめします。
      • 試料の分注後、ただちにプレートに蓋をかぶせてください。
      
      
      
    
    
    
  • 1-4. ライセート試液の添加および測定
    
    • 完全に溶解したライセート試液0.1mLをシリンジで所定のウェルに添加する。
    • プレートに蓋をかぶせ、ウェルリーダーアドバンスにセットする。
    • [測定]ボタンをクリックすると、直ちに1分間攪拌され、あらかじめ設定した測定条件で自動的に測定が開始される。
      
      
      
    
    
    
  • 1-5. データ解析
    
    • 測定終了後、ファイルは自動的に保存される。
      • Software for Wellreader, DIエディションであらかじめ設定した解析条件で、自動解析されます。
    
    
  • 1-6. 判定
    
    • [検量線の表示]ボタン－[検量線の情報]ボタンをクリックし、作成した検量線の相関係数 r を求め、その絶対値｜r｜が0.980以上であることを確認する。